培养干细胞尤其iPSC有多种包被方法,例如用动物来源的小鼠滋养层细胞、层粘连蛋白、Matrigel,人来源的基质蛋白等,但是该类生物来源物质在扩产及应用上有一定的限制,其批间稳定性会受生物体差异影响。那么有没有更好的选择呢?赶紧跟着小C一起来往下看吧。
Corning Synthemax 为无外源合成多肽共聚物,模拟细胞天然环境中胞外基质的特性支持贴壁细胞生长,使用方法方便快捷,可以用水直接溶解进行多种培养器皿表面包被,可在保证多能分化潜能的前提下支撑多功能干细胞扩增培养,包括iPSC和ES等。
Synthemax表面可以在保障干细胞分化多能性的情况下,在无血清培养基中维持干细胞进行20代以上的扩增。
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稳定的细胞倍增时间和细胞活力
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维持干细胞未分化状态及细胞形态,例如marker Oct4, TRA-1-60, SSEA4的表达
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维持常规核型
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定向分化成特定组织类型,例如心肌细胞。
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合成工艺,无外源添加,适用于GMP级别细胞生产工艺
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批间一致性好,可追溯
图1 . 在四种培养方式中,iPSC(201B7) 细胞形态相近,第一种条件下细胞形态略微有一点不同,但在后续性能验证中无明显差异。bar=100µm
图2. 对人iPSC连续10代培养的倍增时间,每种条件下各代次进行3次平行培养。四种培养条件下倍增时间接近,均可满足人iPSC的培养
图 3. 每种培养条件下iPSC未分化状态Markers染色结果,bar=100µm。四种培养条件下iPSC未分化状态标志蛋白表达情况无明显差异,均可满足人iPSC的扩增培养
图 4. 四种培养条件下培养的人iPSC OCT4或者SSEA-4表达情况流式分析结果,四种条件相类似无明显差异
图 5. 人iPSC在MEF上先培养然后进行培养表面转换后倍增时间对比结果。虽然在刚转换时有微小差异,但在后续传代中趋于一致。蓝色线: MMEF直接转换为Corning Synthemax;红色线:MMEF 先转换为Matrigel包被表面再转换为Corning Synthemax包被表面
图 6. 在第一种和第四种培养条件下的iPSC 进行定向分化,形成具有收缩功能拟胚体的百分比分别为40%左右和30%左右。橙色为第一种培养组合Corning Synthemax + X Medium;绿色为第四种培养组合MEF Feeder Cells + E Medium。6次独立实验,480EBs/实验/培养条件
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采用Corning Synthemax包被、Corning Matrigel包被及小鼠MEF细胞和培养基的4种组合条件对人源iPSC 进行传代培养,倍增时间无明显差异。四种组合条件下进行iPSC传代培养,未分化状态标志物表达情况无明显差异,均可保持多次传代培养中iPSC的多能分化潜能。
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Corning® Synthemax™ 可有效支持iPSC连续传代扩增培养,效果与传统的MEF培养方法以及现在普遍使用的Matrigel包被方法无明显差异。
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- 文章来源于康宁生命科学
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